Czarownice pojawiają się po raz pierwszy w Akcie 1, Scenie 3, kiedy spotykają Makbeta i Banko na wrzosowisku. Witają Makbeta trzema przepowiedniami:że zostanie tanem Cawdoru, tanem Glamis i królem Szkocji. Banko otrzymuje również trzy proroctwa, ale nie są one tak szczegółowe. Przepowiednie czarownic zasiewają w umyśle Makbeta nasiona ambicji, a on zaczyna knuć spisek, aby je spełnić.
Czarownice pojawiają się ponownie w Akcie 3, Scenie 5, kiedy Makbet odwiedza je w ich jaskini. Pokazują mu serię wizji, które przedstawiają jego przyszłość i konsekwencje jego działań. Czarownice mówią także Makbetowi, że zostanie pokonany przez „Las Birnam” i „mężczyznę, który nie zrodził się z kobiety”. Te proroctwa sprawiają, że Makbet wierzy, że jest niepokonany, a w dążeniu do władzy staje się jeszcze bardziej bezwzględny.
Czarownice odgrywają kluczową rolę w upadku Makbeta. Wprawiają w ruch wydarzenia, które prowadzą do jego zagłady i zapewniają mu fałszywe poczucie bezpieczeństwa, które ostatecznie prowadzi do jego porażki. Czarownice są potężną i niebezpieczną siłą, reprezentującą ciemną stronę ludzkiej natury.
Oprócz tworzenia poczucia tajemniczości i napięcia, czarownice służą także do komentowania tematów sztuki. Reprezentują nadprzyrodzone siły, które mogą wpływać na ludzkie zachowanie i pokazują, jak łatwo ludzie mogą zostać zepsuci przez ambicję i władzę. Czarownice są ostrzeżeniem dla widzów, że niekontrolowana ambicja może prowadzić do tragicznych konsekwencji.