Główni bohaterowie:
* Sherlock Holmes: Genialny detektyw, znany ze swojego dedukcyjnego rozumowania i umiejętności obserwacji.
* Dr. John H. Watson: Lojalny przyjaciel i kronikarz Holmesa, często przedstawiający punkt widzenia czytelnika.
* Maria Morstan: Młoda kobieta poszukująca informacji o zniknięciu ojca i otrzymanym tajemniczym „Znaku Czterech”.
* Jonathan Small: Nikczemny, ale ostatecznie tragiczny twórca kradzieży skarbu Agry i „Znaku Czterech”.
* Tadeusz Sholto: Były wspólnik Jonathana Small'a w zbrodni, który dziedziczy część skarbu Agry. Zostaje zamordowany, zanim historia się zacznie.
* Athelney Jones: Detektyw Scotland Yardu, często wyśmiewany przez Holmesa za jego zbyt metodyczne i mniej intuicyjne podejście.
Inne ważne postacie:
* Pani. Hudson: Gospodyni 221B Baker Street, gdzie mieszkają Holmes i Watson.
* Plemię Tonga: Grupa tubylców z Andamanów, lojalna Jonathanowi Smallowi i realizująca jego plany.
* „Znak czterech”: Nazwa nadana czterem unikalnym przedmiotom:srebrnej przypince, małemu, zdobionemu pudełku, kawałkowi ołowianej fajki i obroży dla psa. Przedmioty te są powiązane z kradzieżą skarbu Agry.
Postacie drugoplanowe:
* Bartłomiej Sholto: Brat Thaddeusa, który dziedziczy część skarbu Agry i staje się celem Jonathana Smalla.
* Pani. Sholto: Matka Tadeusza i Bartłomieja, która obawia się o ich bezpieczeństwo.
* Pani. Morstan (matka Marii): Kobieta, która kiedyś była zakochana w Thaddeusie Sholto, a która zmarła w tajemniczych okolicznościach.
* Inspektor Bradstreet: Inspektor Scotland Yardu współpracujący z Athelneyem Jonesem.
Należy pamiętać, że choć opowieść koncentruje się przede wszystkim na głównych bohaterach, wiele postaci drugoplanowych dodaje warstwom fabułę i przyczynia się do ogólnej atmosfery powieści.