Technika Kirby’ego-Bauera jest standardową metodą mikrobiologiczną stosowaną do określania wrażliwości bakterii na środki przeciwdrobnoustrojowe. Polega na pomiarze strefy zahamowania wzrostu bakterii wokół krążków nasączonych antybiotykiem, umieszczonych na płytce agarowej zaszczepionej organizmem testowym. Oto ogólne etapy techniki Kirby-Bauera:
1. Przygotowanie inokulum :
- Uzyskuje się czystą kulturę testowego szczepu bakteryjnego i hoduje się go w odpowiednim bulionowym podłożu hodowlanym w celu osiągnięcia logarytmicznej fazy wzrostu (zmętnienia).
- Zawiesina bakteryjna jest standaryzowana do określonego zmętnienia, zwykle odpowiadającego wzorcowi zmętnienia 0,5 McFarlanda, aby zapewnić stałą gęstość inokulum.
2. Zaszczepianie płytki agarowej :
- Do testu używa się sterylnych płytek agarowych zawierających agar Muellera-Hintona lub inne odpowiednie podłoże agarowe.
- Używając sterylnego wacika, standaryzowane inokulum równomiernie rozprowadza się na powierzchni płytki agarowej, tworząc zlewający się obszar wzrostu bakterii.
- Zaszczepioną płytkę pozostawia się do wyschnięcia na kilka minut, aby wchłonąć nadmiar wilgoci.
3. Zastosowanie krążków antybiotykowych :
- Sterylne krążki z antybiotykami zawierające środki przeciwdrobnoustrojowe w określonym stężeniu umieszcza się na powierzchni płytki agarowej w równych odstępach za pomocą sterylnych pęset lub dozownika w formie krążka.
- Krążki są delikatnie dociskane, aby zapewnić dobry kontakt z powierzchnią agaru i nie uszkodzić krążków.
4. Inkubacja :
- Zaszczepiona płytka z krążkami z antybiotykami jest inkubowana w odpowiedniej temperaturze (zwykle 35–37°C) przez określony czas (zwykle 16–24 godziny), aby umożliwić wzrost bakterii i dyfuzję środków przeciwdrobnoustrojowych.
5. Pomiar stref zahamowania :
- Po inkubacji płytki bada się pod kątem obecności stref hamowania wokół krążków antybiotykowych.
- Za pomocą linijki lub suwmiarki cyfrowej średnicę każdej strefy hamowania mierzy się w milimetrach.
- Średnica strefy wskazuje wrażliwość organizmu testowego na konkretny antybiotyk.
6. Interpretacja wyników :
- Zmierzone średnice stref porównuje się ze znormalizowanymi tabelami lub wytycznymi, takimi jak te dostarczone przez Instytut Standardów Klinicznych i Laboratoryjnych (CLSI), w celu określenia wrażliwości lub oporności organizmu testowego na badane środki przeciwdrobnoustrojowe.
- Organizmy są klasyfikowane jako wrażliwe, średnio podatne lub oporne w oparciu o wielkość stref zahamowania i ustalone kryteria interpretacji.
7. Kontrola jakości :
- Aby zapewnić dokładność i wiarygodność techniki Kirby-Bauera, do każdej serii testów włączane są szczepy kontroli jakości o znanych wzorcach wrażliwości, aby monitorować skuteczność metody i zastosowanych odczynników.
Aby uzyskać wiarygodne i istotne klinicznie informacje z testów wrażliwości na antybiotyki Kirby-Bauera, ważne jest przestrzeganie standardowych procedur i interpretowanie wyników zgodnie z ustalonymi wytycznymi.